厭氧培養(yǎng)工作站的目的是指把微生物置于與分子態(tài)氧隔絕狀態(tài)下所進行的培養(yǎng),適用于兼性厭氧菌和專性厭氧菌。 由于目的不同而有不同的培養(yǎng)方法,可分為以下幾大類:
(1)與空氣隔絕或盡量少接觸空氣的培養(yǎng)法:在三角瓶瓶頸以下裝滿液體培養(yǎng)基,通過煮沸把溶解的空氣趕出后,立即冷卻進行細菌接種。由于發(fā)酵而產生H2和CO2時,就可進一步確認是厭氧細菌。
另外,把瓊脂培養(yǎng)基加入普通試管約10厘米高度進行穿刺培養(yǎng),或移植于液體培養(yǎng)基和固體斜面培養(yǎng)基上以后,再加一層液體石臘或礦物油,用這些方法可防止與空氣接觸。
(2)除掉空氣的方法:把微生物裝入耐壓容器中進行真空培養(yǎng),或充滿二氧化碳、氫氣、氮氣、氬氣等。這些氣體可把事先混入的微量氧氣除掉。在氫存在時,可用置換后飛濺火花等方法來除掉殘存的氧氣
(3)去氧的方法:使用堿性鄰苯 三酚(pyrogallol) 、黃磷、金屬鉻和稀硫酸進行化學除氧,或使用好氧細菌及發(fā)芽的種子,使通過呼吸而消耗掉氧氣。
(4)在培養(yǎng)基中加入還原劑(如0.1%的巰基乙酸鈉鹽,0.01%的硫化鈉等)。以上各種方法進行適當組合就能進一步確認厭氧細菌。為了確定厭氧性,可在堿性條件下加入葡萄糖并加熱,與配制的還原型次甲藍(美藍)溶液一起加入,保持脫色狀態(tài)即可。